青霉素皮肤试验实质上是应用极少的抗原（激发反应）注射于皮内，测试人体内是否存在有相应抗体的一种方法，体内有青霉素抗体者可出现反应。

青霉素为小分子化合物，本身并无外抗原性，但其极不稳定，分子中尤其β-内酰胺环易发生重排、分解和聚合，其降解物（苄基青霉素噻唑基、青霉烯酸分别占95%和5%）和杂质，具高度活性，与体内蛋白质牢固结合，形成结合抗原。后者与多数严重的过敏反应密切相关。 过敏反应的发生是抗原与抗体多价结合的结果，多价结合后发生桥联反应促使组胺释放，导致速发型过敏反应发生。青霉素药物血清病型反应发生率为2%～7%，过敏性休克发生率为0.004%～0.04%，所以青霉素用前须做皮试。 

无论注射或口服给药，用前均须皮试，可用青霉素皮试液，也可用所需药皮试液，对阳性反应者禁用。但是，在实际工作中，如果药品说明书上写了口服的要求做就做，没写就不要求做，但需仔细询问是否有过敏史，或者是否是过敏体质的。